Цена: 2 970.00 RUB

Вы можете добавить товар в корзину, указав количество

Производитель: Оболенск

Страна: Россия

Ед. изм.: кг

Вид упаковки: полиэтиленовая банка

Артикул: О9

Описание

Питательная среда Левина-ГРМ с эозинметиленовым синим для выделения патогенных и условно патогенных энтеробактерий из исследуемого материала, их дифференциация по признаку ферментации лактозы. На среде так же можно выделить коагулазоположительных стафилококков. Эозин и метиленовый синий придают селективные свойства. В виде сухого порошка, фасовки 250 гр достаточно для приготовления 6,6 л плотной агаровой среды

Дифференциально-диагностическая селективная среда, принцип действия основан на способности некоторых бактерий к ферментации лактозы с образованием продуктов, смещающих рН в кислую сторону, и как следствие изменение цвета комплекса индикаторов, окрашивающих колонии кислотообразующих бактерий в темно-фиолетовый цвет. В результате культивирования получается четкая дифференциация в виде изолированных единичных колоний: лактозоотрицательные образуют прозрачные или полупрозрачные бесцветные колонии с возможной незначительной пигментацией, например, Staphylococcus aureus, Shigella flexneri. Лактозоположительные энтеробактерии формируют непрозрачные от светло-сиреневого до фиолетового цвета с зеленоватым металлическим блеском или без него, в частности у E. coli

Состав среды: панкреатический гидролизат рыбной муки, дрожжевой экстракт, лактоза, натрий фосфорнокислый двузамещенный, натрий хлористый, эозин-Н, метиленовый синий, агар.
В виде гомогенного сухого, легко растворимого порошка светло-сиреневого цвета.
Готовая среда прозрачная, от светло-сиреневого до красновато-коричневого цвета.
Кислотность среды: при 25°С имеет рН 7,2 ± 0,2.
Готовую среду можно использовать в течение первых трех дней при температуре хранения +2...8°C в темном месте.
Форма выпуска: сухой порошок в полиэтиленовых банках по 250 г.
Условия хранения: в герметично закрытой упаковке в сухом защищенном от света месте при температуре +2...30°C.
Срок годности - 2 года с даты производства, указанной на упаковке.
Регистрационное удостоверение № ФСР 2008/03063

Левина-ГРМ Оболенск Питательная среда с эозин-метиленовым синим для выделения и дифференциации патогенных и условно патогенных энтеробактерий, а также для выделения стафилококков, сухая.

Цена за упаковку 0,25 кг

ИНСТРУКЦИЯ по применению питательной среды с эозин-метиленовым синим сухой — Среда Левина-ГРМ Оболенск

Среда Левина-ГРМ Оболенск предназначена для бактериологических исследований в санитарной и клинической микробиологии с целью выделения и дифференциации патогенных и условно патогенных энтеробактерий, а также для выделения стафилококков.

Среда Левина-ГРМ Оболенск представляет собой мелкодисперсный, гигроскопичный, светочувствительный порошок светло-сиреневого цвета.

Выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г.

2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ

Наличие в среде эозина и метиленового синего придают ей селективные свойства.

Дифференцирующая способность среды основана на изменении рН среды под действием кислоты, образующейся при ферментации бактериями лактозы. Комплекс индикаторов в кислой зоне окрашивает колонии кислотообразующих бактерий в темно-фиолетовый цвет, некоторые колонии имеют зеленоватый металлический блеск.

2.2. СОСТАВ

Среда Левина-ГРМ Оболенск представляет собой смесь сухих компонентов из расчета, г/л:

Среда Левина-ГРМ должна обеспечивать на всех засеянных чашках Петри рост тест-штаммов Shigella flexneri 1a 8516 и Escherichia coli 168/59 (O111:K58) через 18-20 ч инкубации при температуре (37±1) °С при посеве по 0,1 мл микробной взвеси культуры каждого тест-штамма из разведения 10 -7 , и рост тест-штамма Staphylococcus aureus 209-P (АТСС 6538-Р) через 48 ч инкубации при температуре (37±1) °С при посеве по 0,1 мл микробной взвеси культуры тест-штамма из разведения 10 -5 .

Дифференцирующие свойства среды. Питательная среда должна обеспечивать чёткую дифференциацию шигелл от эшерихий на всех засеянных чашках при посеве по 0,1 мл микробной смеси S. flexneri 1a 8516 и E. coli 168/59 (O111:K58) из разведения 10 -6 (в соотношении 1:1) через 18- 20 ч инкубации при температуре (37±1) °С.

Потенциальный риск применения питательной среды в соответствии с Приказом
МЗ РФ №4н от 06.6.2012 — класс 2 а.

• Термостат обеспечивающий температуру 37±1 °С
• Весы лабораторные 2 класса точности
• Автоклав
• Пробирки стеклянные
• Пипетки стеклянные позволяющие отбирать объемы жидкости 1 и 2 мл
• Цилиндр стеклянный мерный вместимостью 1000 мл
• Чашки Петри стерильные
• Вода дистиллированная
• Колбы
• Воронки стеклянные

Объекты исследований в клинической лабораторной диагностике (кровь, желчь, моча, гной и т.д.).

Исследование проводят в условиях бактериологической лаборатории медицинскими специалистами.

7.1. Приготовление среды Левина-ГРМ Оболенск.

Порошок в количестве, указанном на этикетке для приготовления конкретной серии питательной среды, размешивают в 1 л дистиллированной воды, кипятят в течение 3 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют автоклавированием при температуре 110 °С в течение 20 мин. Стерильную среду охлаждают до температуры
45-50 °С, разливают в стерильные чашки Петри слоем 5-6 мм. После застывания среды чашки подсушивают при температуре (37±1)°С в течение 40-60 мин. Готовая среда в чашках Петри прозрачная, от светло-сиреневого до красновато-коричневого цвета.

Стерильную среду можно использовать в течение 3-х дней при условии ее хранения при температуре 2-8 C.

7.2. Взятие, посев инфицированного материала и учет результатов производят в соответствии с “Методическими указаниями по микробиологической диагностике заболеваний, вызванных энтеробактериями” (М., 1984 г) и приказом Минздрава СССР от 22.04.85 г., № 535 “Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений”.

7.3. Исследуемый материал стерильным шпателем тщательно втирают по всей поверхности среды. Инкубируют при температуре (37±1) °С в течение 46-48 ч.

Через 18-20 ч инкубации при температуре (37±1) °С визуально учитывают характер роста культур S. flexneri 1a 8516 и E.coli 168/59 (O111:K58) и через 46-48 ч характер роста культуры S.aureus 209-P (АТСС 6538-Р).

Колонии S.flexneri 1a 8516 должны быть круглыми, прозрачными, бесцветными или слабо-розовыми, диаметром 1,0-1,5 мм.

Колонии E.coli 168/59 (O111:K58) должны быть круглыми, темно-фиолетового цвета с зеленым металлическим блеском (возможно наличие отдельных колоний без металлического блеска), диаметром 1,5-2,0 мм.

Колонии S. aureus 209-P (АТСС 6538-Р) должны быть круглыми, бесцветными или светло-фиолетовыми с темным центром, диаметром до 1,0 мм.

Утилизация серий среды Левина-ГРМ Оболенск с истекшим сроком годности производится по
СанПиН 2.1.7.2790-10 как медицинские отходы, принадлежащие к классу «А» — эпидемиологически безопасные отходы.

Уничтожение среды Левина-ГРМ после проведения биологического контроля осуществляется по СанПиН 2.1.7.2790-10 как медицинские отходы, принадлежащие к классу «Б» с обязательным предварительным обезвреживанием путем автоклавирования в течение 2 ч при температуре (133±1) ˚С.

Обращение с медицинскими отходами следует выполнять согласно схеме, принятой в конкретной организации, осуществляющей медицинскую и (или) фармацевтическую деятельность. Данная схема разрабатывается в соответствии с требованиями вышеуказанных санитарных правил и утверждается руководителем организации.

Среда Раппопорта является средой обогащения и дифференциально-диагностической средой. В ее состав входит: желчный бульон 10%, 2% глюкоза, индикатор (кислый фуксин, обесцвеченный щелочью; в щелочной среде бесцветный, в кислой – красный). Назначение: для накопления тифо-паратифозных бактерий при посеве крови больного, а также для ориентировочной дифференциации тифо-паратифозных бактерий. Принцип д-я: при росте тифо-паратифозных бактерий из-за ферментации глюкозы происходит диффузное помутнение и покраснение среды. Для паратифозных бактерий, в отличие от брюшно-тифозных, наличие в поплавке газа.

Среда Эндо – дифференциально-диагностическая. Состав: МПА, лактоза, индикатор – основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия. Назначение: для рассева исследуемого материала с целью получения изолированных колоний. Принцип д-я основан на способности некоторых микроорганизмов разлагать или не разлагать лактозу (сальмонеллы не разлагают и образуют бесцветные колонии).

Среда Левина является слабо селективной и дифференциально-диагностической. В ее составе МПА, тактоза, индикаторы: эозин и метиленовый синий, калий гидрофосфат. Назначение и принцип д-я см. среду Эндо.

Среда Рессела Состав: МПА, лактоза 1%, глюкоза 0,1%, индикатор (водный голубой и розоловая к-та; в щелочной среде розовая, в кислой – синяя). Назначение: для отсева «подозрительных» колоний с целью выделения чистых культур и определения их ферментативной активности по отношению к глюкозе и лактозе. Принцип д-я:

Среда Клиглера – комбинированная, дифференциально-диагностическая. Состав: МПА, лактоза 1%, глюкоза 0,1%, натрий тиосульфат, железо II сульфат, индикатор – феноловый красный (в щелочной среде – красный, в кислой – желтый). Назначение: для отсева «подозрительных» колоний с целью выявления чистых культур и определения их ферментативной активности по отношению к глюкозе, лактозе и образования Н2S. Принцип д-я: энтеробактерии, имеющие фермент тиосульфат-редуктазу, восстанавливают тиосульфат в сульфит, при этом выделяется сероводород, который реагирует с железо-сульфатом – в рез-те образуется сульфид железа черного цвета.

Серологическая идентификация выделенной чистой культуры с помощью адсорбированных монорецепторных О- и Н- агглю­тинирующих сальмонеллезных сывороток. Серологическая идентификация проводится в реакции агглютинации на стеке с агглютинирующими адсорбированными сальмонеллезными О- и Н-сыворотками, эти сыворотки м.б. 2-х видов: монорецепторными и поливалентными, их получают из видовых иммунных сывороток методом адсорбции антител по Кастеллани.

Серологическая идентификация протекает последовательно в 3 этапа:

1) Установление принадлежности культуры к серогруппам А, В, С, D, Е, рода Salmonella. При этом используют поливалентную О-сыворотку, содержащую антитела против антигенных рецепторов 2, 3, 4, 7, 9, 10. Монорецепторные О-сыворотки применяют против редких серогрупп. При диагностике паратифа А и В, брюшного тифа можно использовать смесь О-сывороток, сорержащих антитела к рецепторам 2, 4, 9.

2) При положительном рез-те для определения принадлежности испытуемой культуры к определенной серогруппе ставят р-цию агглютинации раздельно с каждой монорецепторной О-сывороткой, входившей в состав поливалентной: рецептор 2 относится к серогруппе А, рецептор 4 – к серогруппе В, рецептор 7 – к серогруппе С и т.д.

3) После определения серогруппы, определяем ее видовую принадлежность при помощи р-ции агглютинации с адсорбированными монорецепторными Н-сыворотками против Н-антигенов 1-й фазы сальмонелл, входящих в состав данной серогруппы. Затем проводят р-цию агглютинации с адсорбированными Н-сыворотками против Н-антигенов 2-й фазы и окончательно устанавливают антигенную формулу испытуемой культуры.

Бактерионосительство при брюшном тифе. Какими серологи­ческими реакциями можно подтвердить хроническое бактерио­носительство? Диагностикумы, используемые для этой цели. Единственным доказательством бактерионосительства является выделение от носителя культур S. typhi, S. paratyphi A, S. paratyphi B, с помощью вспомогательных методов: серологическая р-ция и алергическая кожная проба с Vi-тифином (он содержит Vi-антиген, который при взаимодействии с Vi-антителами дает местную аллергическую р-цию в виде покраснения и припухлости в течении 20-30 минут). Положительная р-ция с Vi-тифином говорит о том, что в орг-ме есть Vi-антитела и возможно S. typhi.

Хр. бактерионосительство подтверждается РНГА. При этом используются Vi-диагностикум, т.к. при формировании брюшнотифозного бактерионосительства хар-но проявление Vi-антител; диагностический титр р-ции 1:40.

Способы заражения брюшным тифом. Источник инфекции. Заражение брюшным тифом происходит только оральным путем. Источником инфекции являются больные люди и бактерионосители (представляют опасность для окружающих в течении нескольких лет после перенесенной болезни).

ЛЕВИНА СРЕДА (M. Levine, амер. бактериолог, род. в 1889 г.; син. агар с эозином и метиленовым синим ) - цветная элективная питательная среда для дифференцирования бактерий сем. Enterobacteriaсеае, используется при лабораторной диагностике дизентерии, брюшного тифа, сальмонеллезов и других кишечных инфекций. Впервые агар с эозином и метиленовым синим был предложен в 1916 г. Холт-Харрисом и Тигом (J. E. Holt-Harris, О. Teague), позднее, в 1918 г., состав среды был модифицирован Левином.

Л. с. наряду с другими твердыми цветными дифференциально-диагностическими питательными средами для энтеробактерий нашла широкое применение в лаб. практике. С ее помощью удается в сравнительно большом проценте случаев обнаружить патогенную лактозонегативную микрофлору. Готовая Л. с. довольно стабильна, не изменяет своих свойств на свету или при хранении на протяжении нескольких дней; при ее изготовлении не требуется точного установления концентрации водородных ионов (pH). Входящие в состав Л. с. органические красители избирательно задерживают рост грамположительных бактерий, благодаря чему она одновременно является средой обогащения и дает относительно лучшие результаты при непосредственном посеве исследуемого материала, даже если он содержит сравнительно малое количество патогенных бактерий.

В зависимости от качества отдельных ингредиентов (пептона и в особенности красителей) получаемые на Л. с. результаты могут несколько варьировать, поэтому при изготовлении каждой новой серии среды желательно использование материалов одной и той же марки, что значительно облегчает распознавание колоний.

Известно несколько прописей и способов приготовления Л. с. (Ю. А. Козлов, Г. Я. Синай, О. Г. Биргер и др.). Наибольшее распространение получил способ, при к-ром раздельно готовят основную среду, р-ры лактозы и красителей, пригодные для сохранения впрок и смешиваемые перед употреблением.

Основная среда состоит из 10 г бактериологического пептона, 15 г агар-агара, 2 г фосфата калия двузамещенного (K2HPO4) и 1 л дистиллированной воды. Ее стерилизуют в автоклаве при 1 ат 15-20 мин., pH не исправляют.

При приготовлении дифференциальной среды на каждые 100 мл расплавленной основной среды при постоянном помешивании добавляют приготовленные на дистиллированной воде и предварительно простерилизованные текучим паром (дробно, 3 дня подряд по 15-20 мин.) следующие р-ры в приведенной последовательности 5 мл 20% р-ра медицинской лактозы, 2 мл 2% р-ра эозина щелочного (бактериологического), 1,5 мл 0,5% р-ра метиленового синего. Готовую среду разливают в чашки Петри, слегка подсушивают и используют как обычно. Цвет среды сине-фиолетовый.

Колонии кишечной палочки на Л. с. небольшие, округлые, с гладкой блестящей поверхностью, темно-синего (до черного) цвета, иногда с металлическим блеском. Молодые колонии мутноватые, непрозрачные, могут быть окрашены только в центре. Колонии возбудителей дизентерии, брюшного тифа и паратифов относительно более мелкие, круглые, блестящие и прозрачные, обычно совершенно бесцветные (молодые) или с легким розоватым или голубоватым оттенком. Колонии протея ползучего роста не дают; они небольшие, изолированные, оранжево-желтого цвета. Среда меняет свой цвет только вокруг колоний протея.

Некоторые авторы рекомендуют увеличивать количество 0,5% р-ра метиленового синего до 2 мл на 100 мл основной среды или исключать из ее состава фосфатный буфер. Можно готовить среду не с пептоном, а на основе перевара Хоттингера, при pH 7,2-7,3 с добавлением соответствующего прописи количества агара и фосфорнокислого калия. Применение мясной воды для приготовления среды недопустимо, дифференциация колоний в этом случае значительно ухудшается.

Известен способ приготовления сухой Л. с., очень стабильной по качеству и особенно удобной для длительного хранения и в условиях экспедиционной работы (Н. В. Плоскирев).

Стабильная сухая Л. с. выпускается промышленностью, инструкция по ее изготовлению и применению рассылается вместе со средой. Большинство диагностических лабораторий применяет для выделения и дифференцирования патогенных энтеробактерий высококачественные стандартные элективные сухие питательные среды отечественного производства - Л. с., бактоагар Ж, среду Плоскирева (см. Плоскирева среда).

Библиография: Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней, под ред. К. И. Матвеева, с. 110, М., 1973; Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, под ред. М. О. Биргера, с. 58, М., 1973; Levine М. The effect of concentration of dyes on differentiation of enteric bacteria on eosin- methylene- blue agar, J. Bact., v. 45, p. 471, 1943.

Г. П. Беликов.

Сухую среду в количестве 40 г размешать в 1 л воды очищенной, довести до кипения и кипятить до полного расплавления агара (2-3 мин), профильтровать через ватно-марлевый фильтр, Разлить в стерильные бутылки и стерилизовать автоклавированием при температуре 112 оС в течение 20 мин. Стерильную среду охладить до температуры 45-48оС и разлить в стерильные чашки Петри; после застывания агара подсушить чашки при температуре 37оС в течение 40-60 мин. Цвет готовой среды должен быть красновато кирпичный.

Готовую среду до использования можно хранить в темном месте не более 7 сут при температуре 2-8°С.

Посевы исследуемых образцов инкубировать 18-48 ч при температуре 37°С Контроль роста визуальный – по наличию или отсутствию и внешнему виду колоний. Лактозоположительные микроорганизмы образуют непрозрачные колонии от светло-сиреневого до фиолетового цвета с металлическим блеском или без него. Лактозоотрицательные микроорганизмы образуют прозрачные или полупрозрачные бесцветные колонии (могут образовывать колонии бледно-розового цвета).

Утилизация сухих сред с истекшим сроком хранения и использованных готовых питательных сред – в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.728-99 Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений.